Preparação padrão:
Prepare um padrão conservado em estoque misturado exatamente pesando (magnésio ±0.01) magnésio aproximadamente 10 de cada padrão de referência do kavalactone em uma garrafa 10-mL volumétrico. Adicione 7,0 mL do metanol e sonicate até dissolvido. Dilua ao volume com o metanol e misture.
Observação: Alternativamente, prepare um padrão do estoque do kavain de maneira similar e use os fatores de resposta do kavalactone para determinar contra.
Dilua o padrão conservado em estoque para criar um mínimo de uma curva do padrão do quatro-ponto. As diluições padrão sugeridas do estoque são 1:10, 1:25, e 1:100 usando o metanol.
Observação: Armazene padrões nas temperaturas refrigeradas (0 - 5°C). Kavalactones degrada rapidamente após 48 horas. A preparação de padrões de referência frescos antes de cada análise é recomendada.
Instrumento
· Equilíbrio analítico calibrado exato a magnésio ±0.01
· Garrafa, volumétrico, classe A, tamanhos sortidos
· Tubos de ensaio, cromatografia com tampão
· Sistema da cromatografia líquida do elevado desempenho como descrito no capítulo de USP. Verifique e documente esse instrumento, software, e os subsistemas cumprem exigências do desempenho para a qualificação da instalação/qualificação da operação (IQ/OQ).
· Filtre, 0,45 µm, nylon de Gelman Acrodisc (P/N 4426), polipropileno de Whatman Puradisc™ (gato. No. 6788-2504), vidro de Whatman GD/X (gato. No. 6894-2504) ou Sonicator equivalente
· Coluna, YMCbasic, 5 µm, 4,6 x 250 milímetros (gato. Não BA99S05-2546WT). Coluna equivalente, YMC J'Sphere H80, 4µ, 4,6 x 250 (gato. Não JH08S04-2546WT).
Reagentes
· Água, categoria da HPLC ou Nanopure
· Metanol, categoria da HPLC
· Acetonitrilo, categoria da HPLC
· Ácido fosfórico, categoria do reagente de ACS
Preparação da amostra:
Planta
Pese exatamente (± 0.1mg) magnésio aproximadamente 750 da haste, da casca, ou do material finamente moído da raiz.
Coloque o material em uma garrafa 50-mL volumétrico junto com 40 mL do metanol/água (70/30). Sonicate por 60 minutos na temperatura ambiente.
Permita que a garrafa refrigere à temperatura ambiente e dilua-se ao volume com o metanol/água (70/30) e misture-se.
Amostra do filtro e do lugar em um tubo de ensaio e em um tampão da HPLC.
Pó e extrato macio (pasta)
Pese exatamente (magnésio do ± 0,1) magnésio aproximadamente 100 do extrato em uma garrafa 50-mL volumétrico. (Os 100 pesos do magnésio são baseados em um índice do kavalactone 50-60% no extrato.) Observação: Homogeneize com cuidado o extrato antes de provar. Isto é realizado colocando o extrato em um recipiente imergido em um 60° - banho maria quente de 80° C até o fluxo livre.
Adicione 40 mL do metanol e sonicate por 10 minutos ou até todos os sólidos dissolveram-se.
Permita que a garrafa refrigere à temperatura ambiente e dilua-se ao volume com o metanol e misture-se.
Amostra do filtro e do lugar em um tubo de ensaio e em um tampão da HPLC.
Amostras do pó
O extrato de Kava frequentemente é misturado ou pulverizador - é secado em vários portadores. Para analisar com sucesso amostras do pó, é necessário desenvolver uma etapa da preparação da amostra que recupere os kavalactones do portador. Isto pode ser realizado primeiramente extraindo com metanol ou água pura.
Circunstâncias cromatográficas:
Coluna: YMCbasic, 5 µm, 4,6 x 250 milímetros
Temperatura da coluna: 40°C
Caudal: 0,6 mL/min para YMCbasic; 1,0 mL/min para J'Sphere
Fase móvel: 0,1% ácidos fosfóricos isocratic: álcool isopropílico: acetonitrilo (64:16: 20 v/v)
Detecção: 220 nanômetro (246 nanômetro alternativamente para melhorar a seletividade)
Volume da injeção: µL 5
Tempo de execução: 30 minutos
Procedimento:
Prepare soluções padrão de referência e prove preparações como dirigidas.
Faça uma única injeção de uma placa do solvente de extração.
Faça a única injeção das preparações padrão.
Crie um lote das linearidades de áreas máximas padrão contra concentrações padrão.
Faça únicas injeções das preparações da amostra.
Calcule a concentração do kavalactone na amostra.
Conformidade do sistema:
O coeficiente de correlação da regressão linear deve ser ≥0.999. A definição entre o desmethoxyyangonin e os picos do yangonin deve ser ≥1.8.
Biotecnologia Co. da Y-erva de Shaanxi, Ltd.